Observationsmetoder i mikroskopi

Brightfield-observation er den enkleste mikroskopiteknologi. I dette system passerer lys gennem eller reflekteres af prøven uden nogen ændring ud over det, der er forårsaget af selve prøven.

Alt lys fra prøven og omgivelserne opsamles af linsen for at danne et billede på en fuldstændig lys baggrund. Denne type observationer er den mest velegnede til prøver farvet eller med naturlige pigmenter, og som er stærkt kontrasterede.

Det er vidt brugt i patologi og plante- og dyrehistologi, til observation af fine vævsafsnit, vises den kontrastede prøve under en lys baggrund. Det er dog ikke for nyttigt til observation af levende celler.

Darkfield-observationsteknikken er en kontrastteknik uden direkte lys, hvor kun lys, der diffraheres fra prøven, bruges til at danne billedet.

I denne teknik skal prøverne være gennemsigtige og ikke plette. Prøvelyset skal styres, så det centrale lys blokeres. Belysningen (takket være kondensatoren) danner en hul kegle med kun skråt lys, der reflekterer over prøven og omgivelserne. Billedet er dannet med lysstråler spredt af prøven og scenen, som er fanget af målet.

Det er en passende teknik til at observere levende celler og organismer. Dette er tilfældet, fordi kontrasten er skabt af en lys organisme på en mørk baggrund, så vi afslører baggrunde, kanter og konturer af organismen. En af de vigtigste anvendelser er inden for hæmatologi på levende blodlegemer.

Fasekontrastteknikken svarer også til en kontrastobservationsteknik, uanset redundansen. Dette betyder, at resultatet af billedet vil være frugten af lysets passage gennem prøven, normalt levende, og de forskellige brydningsindeks, der følger af dette.

Lys fra en halogen-wolframlampe / -pære føres gennem en opsamlingslinse og fokuseres på specialiserede kondensorringe. Bølgefronter, der passerer gennem ringen, belyser prøven og passerer direkte (eller diffraheres) gennem prøven og forsinkes af prøvegradienterne i prøven. Det ikke-rettede lys, diffraheret og opsamlet af linsen, adskilles af en faseplade og fokuseres på billedets mellemplan for at danne det endelige billede.

Denne teknik anvendes til observation af levende celler eller til undersøgelse af materialer med meget tynde lag.

Fluorescensmikroskopet er baseret på, hvor objekterne er oplyst af stråler med en bestemt bølgelængde. Det observerede billede er resultatet af elektromagnetisk stråling udsendt af molekyler, der har absorberet den primære stråling og genudsendt lys med en længere bølgelængde. Jeg mener, de blev glade. For kun at passere den ønskede sekundære emission skal passende filtre placeres under kondensatoren og over målet.

Vi kunne således bestemme denne observationsteknik som indirekte, da observationen eller resultatet er takket være reaktionen af visse molekyler eller celler på en første type lys eller stråling, som de har absorberet.

Fluorescensmikroskopi bruges til at detektere visse stoffer såsom vitamin A eller fluorokrom-mærkede stoffer. Det tillader også bestemmelse af fordelingen af en enkelt molekyleart, dens mængde og placering inde i cellen. Det er en meget specifik og udviklet teknik, men samtidig meget anvendt i biomolekylær analyse.